Frotiu de sange


Descriere

Examinarea atenta a frotiului de sange bine efectuat este o parte importanta a evaluarii bolilor hematologice. Desi un diagnostic specific poate fi sugerat de datele furnizate de hemograma automata, unele boli pot avea un numar normal de celule, dar morfologie celulara anormala. Frotiul de sange constituie un mijloc valoros in diagnosticul si evaluarea anemiei, anomaliilor eritrocitare ereditare, infectiilor, inflamatiilor, leucemiilor si altor boli limfo- si mieloproliferative etc.

Semnificatie clinica:
I. Aprecierea eritrocitelor pe frotiu: eritrocitele sunt evaluate pentru variatii de marime, forma, distributia hemoglobinei si prezenta de incluzii intracelulare. Examinarea optima a morfologiei eritrocitare se face intr-o arie a frotiului in care hematiile sunt asezate una langa alta, dar nu se suprapun. In mod normal eritrocitele apar de forma rotunda, anucleate, uniforme ca marime si forma, cu un diametru mediu de 7-8 µm (comparabil cu nucleul unui limfocit mic), cu o zona palida centrala care nu depaseste 1/3 din diametrul celulei, inconjurata de o rama rosu-portocalie de hemoglobina.

II. Aprecierea trombocitelor pe frotiu: Se apreciaza numarul si morfologia trombocitara. Trombocitele normale apar ca mici fragmente citoplasmatice de culoare albastru-deschis cu granulatii mici azurofile (rosu-purpurii) difuze, cu diametrul de 2-4 µm, de forma rotund-ovalara. Numarul de trombocite poate fi estimat pe frotiu: prezenta lor în numar de 8-20 pe campul de imersie/~1 trombocit la 10-30 de eritrocite exclude trombocitopenia. Pe frotiul de sange capilar neanticoagulat trombocitele apar aglutinate/agregate, neuniform distribuite.

III. Aprecierea leucocitelor pe frotiu: sunt analizate morfologia si distributia leucocitelor. O estimare a numarului de leucocite se poate face prin scanarea frotiului cu un obiectiv de putere mica:[(nr mediu de leucocite/camp) x103 /μL]/4. Trebuie identificate si numarate cel putin 100 de celule pentru efectuarea formulei leucocitare. Leucocitele prezente in mod normal pe frotiu sunt neutrofilele, eozinofilele, bazofilele, limfocitele si monocitele.Prezenta de precursori mieloizi (metamielocite, mielocite, promielocite, blasti)/devierea la stanga a formulei leucocitare este anormala si apare în infectii bacteriene, intoxicatii, necroze tisulare, hemoragie, hemoliza, carcinoame, reactii leucemoide, sindroame mieloproliferative cronice etc.

Tabloul leucoeritroblastic consta in prezenta în sangele periferic de precursori mieloizi si normoblasti (eritroblasti), de obicei ortocromatofili, indiferent de numarul de leucocite. Cauze:
- Maduva osoasa normala: nou-nascuti, infectii severe, postsplenectomie, hemoliza acuta, hemoragie severa, talasemie intermedia si majora, anemie megaloblastica, anemie feripriva severa, anemie falciforma, boli pulmonare si cardiace cronice, boli hepatice.
- Infiltrare medulara: boli mielo- si limfoproliferative acute si cronice, sindroame mielodisplazice (preleucemice), boli granulomatoase (tuberculoza, fungi), metastaze medulare, mielofibroza.


Recomandari

Recomandari pentru efectuarea frotiului de sange:

- anumite semnale de avertizare indicate de analizorul automat privind unul/mai multi parametri ai hemogramei automate: deviere la stanga, limfocite atipice, blasti, eritroblasti, schizocite, agregate trombocitare;
- daca exista indicatii clinice/au existat modificari anterioare ale frotiului de sange;
- obtinerea in continuare de indicatii diagnostice bazate pe morfologia celulelor sanguine;
1. Evaluarea eritrocitelor pe frotiu:
-  daca nu se aplica regula lui 3 - [Nr. Er (x106/µL) x 3 = Hb (g/dL) x 3 = Hct (%)];
- verificarea valorilor indicilor eritrocitari (VEM, HEM, RDW), daca exista dubii ca analizorul automat a indicat valorile corecte; verificarea prezentei de dubla populatie eritrocitara indicata de histograma;
- evaluarea morfologiei eritrocitare: anemie normocitara normocroma cu reticulocitoza, anemie macrocitara cu RDW crescut, anemie microcitara hipocroma medie/severa cu numar crescut de eritrocite;
- eritrocitoza: Hb >18 g/dL la femeie si >19 g/dL la barbat.
2. Evaluarea trombocitelor pe frotiu:
-
verificarea numarului de trombocite indicat de analizor: trombocite <100x103/µL sau >1x106/µL;
- evaluarea morfologiei trombocitare (daca un VTM crescut corespunde prezentei de trombocite gigante/prezentei de agregate trombocitare, care ar putea interfera cu numarul de trombocite si posibil si cu numarul de leucocite);
3. Evaluarea leucocitelor pe frotiu:
-
verificarea numarului de leucocite si formulei leucocitare indicate de analizor: leucocitoza cu neutrofilie cu nr. de leucocite >13000 la adult, leucocitoza la copii, limfocitoza >5000/µL la adult, limfocitoza la copii, eozinofilie >1500/µL, monocitoza >1300/µL, bazofilie absoluta, neutropenie <1000/µL, pancitopenie;
- efectuarea formulei leucocitare, daca aceasta nu a fost indicata de analizor;
- detectarea de celule anormale.


Pregatire pacient

Se recolteaza a jeun (pe nemancate) sau postprandial (trebuie totusi evitate mesele bogate in lipide care pot interfera cu anumiti parametri ai hemogramei). Sexul, varsta pacientului, precum si anumite conditii cum ar fi: starea de soc, varsaturile incoercibile, administrarea masiva de lichide i.v. etc., care pot duce la deshidratarea, respectiv hiperhidratarea pacientului, precum si anumite tratamente urmate de pacient trebuie comunicate laboratorului. Este de preferat evitarea pe cat posibil a stresului in momentul recoltarii. In cazul monitorizarii regulate (zilnic sau la doua zile) a anumitor parametri, proba de sange pentru efectuarea hemogramei trebuie obtinuta in acelasi moment al zilei (datorita fluctuatiilor fiziologice circadiene ale unor parametri).

Metoda

Se foloseste examinarea microscopica, initial la putere mica (cu obiectivul de 10x/20x) pentru aprecierea coloratiei si distributiei celulare; de asemenea se poate face o estimare a numarului de leucocite, precum si a prezentei de elemente celulare anormale (blasti, eritroblasti), agregate trombocitare, aglutinate eritrocitare/rulouri. Apoi frotiul se examineaza cu obiectivul de 100x cu imersie, fiecare tip celular fiind evaluat pentru anomalii cantitative si calitative.

Pentru cadre medicale

Specimen recoltat - frotiul de sange poate fi efectuat din proba de sange venos recoltata pentru hemograma sau din sange capilar neanticoagulat obtinut direct din deget.

Recipient pentru recoltare
- vacutainer cu K3-EDTA.

Cantitate recoltata - o picatura de sange de marime medie.

Prelucrare necesara dupa recoltare -
frotiul se poate efectua pe lamele (22x22 mm) sau lame de sticla (frotiul cu franjuri) care trebuie sa fie bine uscate, degresate si fara praf/scame. Picatura de sange este intinsa pe suprafata lamei/lamelei si este uscata la aer. Frotiurile efectuate pe lamele asigura o distributie uniforma a sangelui pe suprafata lamelei; pe de alta parte lamele de sticla sunt mai putin fragile, fiind mai usor de manevrat si etichetat, dar prezinta o incidenta crescuta de acumulare a leucocitelor de dimensiuni mari pe marginile frotiului si în franjuri. Un frotiu de calitate acceptabila trebuie sa fie de ~3 cm lungime, 2 cm latime, intins uniform, cu o margine de franjuri scurta (<0.3 cm), o arie de citire în mijloc de 1-1.5 cm si o arie groasa de lungime similara la celalalt capat. Dupa uscare frotiurile sunt fixate cu metanol anhidru si colorate May-Grunwald-Giemsa. Colorantul contine albastru de metilen (convertit la azur metilen cu acid bicromat) si eozinã. Azur metilen este un colorant bazic care coloreaza in albastru-violet componentele celulare acide (acizi nucleici, proteine), iar eozina reactioneaza cu elementele celulare bazice conferind tenta roz-rosiatica componentelor citoplasmatice si hemoglobinei. In  functie de proprietatile lor granulatiile leucocitare se coloreaza diferit permitand analiza lor morfologica: granulatiile neutrofilelor sunt usor bazice  si se coloreaza slab cu componentul azurofil, granulatiile eozinofilelor contin un derivat puternic bazic si se coloreaza intens cu eozina, iar granulatiile bazofilelor contin predominant proteine acide si se coloreaza in albastru inchis-violet.

Stabilitate proba
- frotiurile efectuate din tuburile pentru hemograma trebuie efectuate in primele 2-3 ore de la recoltare. Frotiurile fixate in metanol sunt stabile necolorate cel putin 1 an fara scaderea calitatii.

Cauze de respingere a probei
- tub incorect, specimen coagulat, specimen hemolizat, cantitate insuficienta. Sunt de asemenea neadecvate examinarii frotiurile prea groase /prea subtiri, frotiurile efectuate pe lame de sticla care nu au franjuri, frotiurile incorect colorate/cu precipitate de colorant.



Limite si interferente

1. Care tin de coloratie:
-
celulele sunt colorate excesiv in albastru: timp prea lung de colorare, buffer prea alcalin (incorect preparat/vechi), frotiuri vechi/frotiuri prea groase. Coloratia poate fi imbunatatita prin spalarea rapida si intensa cu apa distilata.
- aria dintre celule este colorata: spalare inadecvata a lamei, sange recoltat pe heparina/posibila paraproteinemie.
- coloratia apare prea roz/rosie: buffer prea acid, timp prea scurt de colorare/spalare excesiva a lamei.

2. Care tin de tehnica de efectuare a frotiului:
- distributie anormala a leucocitelor, cu dispunerea leucocitelor de dimensiuni mari pe marginile frotiului si in franjuri. De asemenea leucocitele de pe margini pot aparea mai mici decat in mod normal (contractate)/rupte. In particular celulele neoplazice se pot rupe datorita presiunii mecanice excesive. Exista variatii mari statistice ale formulei leucocitare manuale in special daca este efectuata numaratoarea pe 100 de celule si in prezenta leucopeniei.

3. Artefacte determinate de EDTA, in special in probele vechi:
-
artefacte ale eritrocitelor: hematii crenelate, hematii in tinta, stomatocite;
- trombocitele pot aparea marite, mai slab colorate si fara granulatiile azurofile caracteristice;
- artefacte ale leucocitelor: vacuolizari/rupturi citoplasmatice, kariorexis nuclear. Monocitele apar cu numeroase vacuole si/sau nucleu neregulat lobulat;
- limfocitele reactive continua sa se modifice morfologic pe masura ce stau in probele cu EDTA, nucleul devenind convolut, iar citoplasma largita si/sau vacuolata (ar putea fi confundate cu celulele limfomatoase);
- nucleul limfoplasmocitelor poate deveni convolut/in forma de frunza de trifoi.

Atentie

Valorile rezultate la interpretarea analizelor pot sa difere de la un laborator la altul. Aceasta sectiune are caracter informativ. Garantia unei interpretari corecte poate fi oferita doar de laboratorul care a efectuat analizele.

Pentru a utiliza ghidul de interpretare al analizelor trebuie sa urmati pasii de mai jos.

  1. Selectati optiunea barbat / femei / copil in functie de persoana care a efectuat analiza;
  2. Introduceti valoarea din buletinul de analize in prima casuta;
  3. Selectati unitatea de masura a acesteia din a doua casuta (acolo unde este cazul);
  4. Apasati butonul "Interpreteaza" pentru a interpreta analiza

Interpreteaza aceasta analiza

barbat femeie copil pana in 12 ani
  •  

    Cere sfatul medicului

    afla raspunsurile la problemele tale

    Afla acum