Fosfataza alcalina leucocitara (sange)

Descriere

Activitatea fosfatazei alcaline este prezenta in citoplasma neutrofilelor, osteoblastelor, celulelor endoteliului vascular si unor limfocite.

 

Recomandari

Recomandari pentru determinarea fosfatazei alcaline leucocitare:

- diferentierea leucemiei granulocitare cronice de alte boli mieloproliferative (in particular metaplazie mieloida cu mielofibroza si policitemia vera) si  de reactiile leucemoide (infectii, neoplazii);
- diferentierea poliglobuliilor secundare de policitemia vera;
- parametru de prognostic in LGC, ce reflecta diferitele faze de activitate ale bolii;
- diferentierea formelor stabile, benigne de hairy cell leukemia (HCL) cu FAL normal, de formele active de boala, cu neutropenie severa si FAL mult crescut.

Pregatire pacient

Se recolteaza a jeun (pe nemancate) sau postprandial (dupa mese).

Metoda

Se foloseste examinarea microscopica. Fosfataza alcalina leucocitara catalizeaza reactia de hidroliza a esterilor fosfati in mediu alcalin. 1-naftolul rezultat din 1-naftil-fosfat se cupleaza cu o sare de diazoniu, formand precipitate brune, in functie de localizarea si activitatea fosfatazei alcaline in celule. Intensitatea si frecventa granulelor se evalueaza prin examen microscopic. Intensitate precipitatului brun este subiectiv gradata de la 0 la 5: - grad 0 = fara pigment, granulatii absente - grad 1 = una-putine granulatii distincte - grad 2 = cateva granulatii localizate - grad 3 = granulatii difuz distribuite - grad 4 = precipitate intense compacte care acopera citoplasma celulelor, dand aspect de pigment continuu, nucleul celulelor fiind insa vizibil - grad 5 = numar maxim de granulatii, cu nucleul frecvent invizibil. Scorul fosfatazei alcaline leucocitare intr-un frotiu este dat de suma scorurilor de colorare a 100 granulocite neutrofile mature.

Pentru cadre medicale

Specimen recoltat - a) sange capilar si/sau aspirat medular - frotiuri; b) se recomanda recoltarea simultana de sange venos pentru hemograma.

Recipient de recoltare - a) se executa frotiuri de sange capilar direct pe lame de microscopie; b) vacutainer cu EDTA K3 (capac mov), pentru hemograma.

Cantitate recoltata - a) 3-5 frotiuri; b) 2 mL.

Prelucrare necesara dupa recoltare - este preferabil ca fixarea frotiurilor sa se faca in primele 30 minute de la recoltare. Eventual, se poate face in primele 8 ore. Amestec fixator: alcool etilic 9 parti + formol 40 % 1 parte. Fixarea se cronometreaza 30 secunde, dupa care frotiurile se spala cu jet de apa de robinet. Frotiurile fixate se pot colora imediat sau se pot pastra cateva zile la temperatura camerei, pana la colorare.

Cauze de respingerea probei - frotiuri nefixate in maxim 8 ore de la recoltare; frotiuri executate din sange recoltat pe EDTA.

Stabilitate proba - frotiurile nefixate sunt stabile maxim 8 ore la 18-30^o C ; frotiurile fixate sunt stabile 5 zile la temperatura camerei.

Limite si interferente

Conditii fiziologice de stress: sarcina, efort fizic intens (cresc indicele FAL).

Conditii patologice: infectiile asociate LGC pot creste valoarea FAL.

Interferente cu medicamente:
Cresteri ale scorului FAL:
- terapia cu factori de crestere, contraceptive orale, preparatele cortizonice, litiu;

Interferente analitice:
Scaderi ale scorului FAL : EDTA (activitatea enzimei scade rapid in timp).
Observatie: Pentru a determina indicele FAL, trebuie sa existe suficiente granulocite neutrofile mature in formula leucocitara.